플라크 형성 장치는 어떻게 계산됩니까?

이봐! 플라크 공급 업체로서, 나는 종종 플라크 - 형성 단위가 어떻게 계산되는지에 대한 질문을받습니다. 약간의 기술적 인 주제이지만 이해하기 쉬운 방식으로 분류 할 것입니다.

먼저, PFU (Plaque -Forming Units)가 실제로 무엇인지 이야기합시다. 간단히 말해서, PFU는 샘플에서 전염성 바이러스 입자의 수를 정량화하기 위해 바이러스학에 사용 된 척도입니다. 바이러스가 배양 접시에서 자란 숙주 세포 층을 감염 시키면 감염된 부위의 세포가 죽게됩니다. 이 죽은 세포 영역을 플라크라고하며, 각 플라크는 단일 전염성 바이러스 입자에 의해 형성된 것으로 가정된다.

그렇다면 PFU를 어떻게 계산합니까? 가장 일반적인 방법은 플라크 분석입니다. 다음은 작동 방식에 대한 단계별 단계입니다.

1 단계 : 바이러스 샘플의 준비

우리는 바이러스가 포함 된 샘플을 복용하는 것으로 시작합니다. 이것은 혈액이나 조직 샘플과 같은 임상 샘플 또는 바이러스 배양의 샘플 일 수 있습니다. 샘플은 일반적으로 연속 희석됩니다. 연속 희석은 소량의 원래 샘플을 복용하여 더 많은 양의 희석제 (보통 완충액)와 혼합한다는 것을 의미합니다. 그런 다음 소량 의이 첫 번째 희석액을 복용하여 더 많은 희석제와 혼합하여 두 번째 희석을합니다.

예를 들어, 우리는 1:10 희석으로 시작할 수 있습니다. 즉, 바이러스 샘플의 1 부분을 가져 와서 희석제의 9 부분과 혼합합니다. 그런 다음이 1:10 희석의 1 개 부분을 가져 와서 희석제의 9 부분과 혼합하여 1 : 100 희석을 만들고 1 : 1000, 1 : 100000 등과 같은 더 많은 희석 샘플을 만들 수 있습니다.

2 단계 : 숙주 세포의 접종

다음으로, 우리는 바이러스에 민감한 숙주 세포 층을 섭취합니다. 이 세포들은 일반적으로 배양 접시에서 자랍니다. 우리는 숙주 세포와 접시를 분리하기 위해 소량의 희석 바이러스 샘플을 소량으로 첨가합니다. 샘플의 바이러스 입자는 숙주 세포에 부착되어 감염되기 시작합니다.

3 단계 : 배양

접종 후, 접시는 일정 시간 동안 배양된다. 이 기간 동안, 바이러스는 감염된 세포 내부에서 복제 될 것이며, 감염된 세포가 죽기 시작하여 플라크를 형성합니다. 인큐베이션 시간은 바이러스의 유형에 따라 다릅니다. 일부 바이러스는 플라크를 형성하는 데 몇 시간이 걸릴 수 있으며, 다른 바이러스는 며칠이 걸릴 수 있습니다.

4 단계 : 플라크 계산

플라크가 형성되면, 우리는 그것들을 세어야합니다. 우리는 단순히 현미경으로 접시를 보거나 플라크 계산 장치를 사용하여이를 수행 할 수 있습니다. 플라크 수가 셀 수있는 범위에있는 요리 만 계산하는 것이 중요합니다. 플라크가 너무 많으면 합쳐질 수 있으며 정확하게 계산하기가 어려울 것입니다. 일반적으로 30 ~ 300 개의 플라크가있는 요리를 목표로합니다.

5 단계 : PFU 계산

원래 바이러스 샘플의 밀리 리터 (PFU/mL) 당 PFU의 수를 계산하려면 다음 공식을 사용합니다.

pfu/ml = (플라크 수) × (희석 계수) ÷ (접시에 첨가 된 바이러스 샘플의 부피)

바이러스 샘플의 1 : 1000 희석증 0.1 ml의 1 : 1000 희석을 접종 한 접시에 50 개의 플라크를 세 었다고 가정 해 봅시다. 희석 인자는 1000이고, 접시에 첨가 된 바이러스 샘플의 부피는 0.1 ml이다.

pfu/ml = (50) × (1000) ÷ (0.1) = 500000 pfu/ml

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참조

• Flint, SJ, Enquist, LW, Racaniello, VR 및 Skalka, AM (2009). 바이러스의 원리 : 분자 생물학, 병인 및 대조군. ASM 프레스.
• Knipe, DM, & Howley, PM (Eds.). (2013). 분야 바이러스학. Lippincott Williams & Wilkins.